Diagnoza COVID-19

Article

May 20, 2022

W celu diagnozy zakażenia koronawirusem-19 pobiera się i analizuje próbki w celu ustalenia, czy wykryto SARS-CoV-2. Dwa główne wykrywają obecność wirusów lub przeciwciał wytwarzanych w odpowiedzi na infekcję. Diagnoza obecności wirusa w organizmie jest wykorzystywana do umożliwienia organom ds. zdrowia śledzenia i powstrzymywania epidemii. Testy przeciwciał pokazują, czy badana osoba ma COVID-19, ale przeciwciała nie są wytwarzane przez kilka tygodni po zakażeniu, więc na tym etapie nie jest to przydatne w diagnozowaniu, czy dana osoba jest zarażona. Diagnoza służy do oceny częstości występowania choroby i pozwala oszacować liczbę osób, które zmarły z powodu infekcji.Analiza próbek diagnostycznych i określenie zakażenia jest wykonywane w laboratorium medycznym przez naukowca laboratorium medycznego przy użyciu automatycznego analizatora. Alternatywnie infekcję można wykryć natychmiast na miejscu lub w gabinecie lekarskim.

Pobieranie, konserwacja i transport próbek

zbiór

Pobiera się próbki z górnych dróg oddechowych (nosa, ust, dróg oddechowych itp.) i dolnych dróg oddechowych (płuca). Personel medyczny umieszcza próbkę z dolnych dróg oddechowych (plwociny) w oddzielnym pojemniku, mając na sobie środki ochrony osobistej, a następnie wprowadza długi, elastyczny bawełniany wacik do jamy nosowej górnych dróg oddechowych w celu zebrania wydzieliny z nosa, np. kataru. tylna ściana nosa. W przypadku wcześniejszego uzgodnienia między klientem a laboratorium surowica jest pobierana. Zgodnie z „Przewodnikiem po testach potwierdzających chorobę zakaźną koronawirusa-19” Centralnej Kwarantanny, rodzaje, dawki i pojemniki każdej próbki są następujące.

Konserwacja i transport

Wszystkie próbki najlepiej przechowywać w stanie schłodzonym (2-8℃) zaraz po pobraniu i jak najszybciej przetransportować je do laboratorium. Jeśli jednak próbki nie można natychmiast przetransportować lub wyhodować, jest ona przechowywana lub transportowana w roztworze konserwującym (np. buforowana sól fizjologiczna glicerolu) lub Cary & Blair lub pożywce transportowej. Wirusy są przechowywane i transportowane w Virus Trasport Media (VTM).Zgodnie z „Wytycznymi dotyczącymi diagnostyki laboratoryjnej nowych koronawirusów 2019” pojemniki na próbki, warunki transportu i instytucje przechowywania są następujące.

test

Testy diagnostyczne wirusów obejmują hodowlę komórkową, test antygen-przeciwciało i test molekularny.

test hodowli komórkowej

Kontrola zajmuje dużo czasu i ma wady polegające na tym, że nie nadaje się do kontroli na dużą skalę. Jest dobry do izolowania wirusa i używania go do innych zadań. Konwencjonalne testy diagnostyczne są oceniane jako nieodpowiednie i niebezpieczne.

Metoda testu antygen/przeciwciało

Jest to metoda testowania antygenu (wirusa) lub sprawdzania przeciwciał powstałych po wniknięciu do organizmu nowego wirusa korony 19. Organizm potrzebuje zwykle około 2 do 4 tygodni, aby wytworzyć przeciwciała przeciwko określonej chorobie zakaźnej, więc trudno jest określić, czy „COVID-19” jest potwierdzony na początkowym etapie zakażenia. Ma jednak tę zaletę, że jest w stanie sprawdzić, czy po „ujemnej” konwersji występuje bezobjawowe (nieświadome) potwierdzone przypadki lub tworzenie przeciwciał. W Chinach wiadomo, że metoda testowania przeciwciał jest wykorzystywana jako środek pomocniczy w stosunku do istniejącej metody testowania.

testy molekularne

W diagnostyce molekularnej cel testowy jest syntetyzowany i testowany przy użyciu sekwencji (sekwencji) genu.

Test Pancorona PCR i analiza sekwencjonowania

Po pierwsze, technologia amplifikacji DNA przy użyciu testu PCR to technologia, która replikuje bardzo małą ilość DNA i amplifikuje go w miarę potrzeb w celu uzyskania wystarczającej próbki określonej sekwencji DNA, która może być użyta do analizy. Na przykład, ponieważ DNA określonej części jest podwajane w każdym procesie, ponad 1 miliard DNA można uzyskać z jednej cząsteczki DNA w zaledwie 30 cyklach. Zazwyczaj w ślinie lub plwocinie pacjenta nie ma wystarczającej ilości wirusa do postawienia potwierdzonej diagnozy, więc obecność lub brak koronawirusa w próbce można łatwo potwierdzić poprzez amplifikację DNA przy użyciu sekwencji nukleotydów, która umożliwia rozróżnienie koronawirusa. potrzeba wykonania zarówno testu koronowego, jak i analizy sekwencjonowania wynosi około 1-2 dni, a trudność testu jest wyższa niż w przypadku nowego testu Corona 19, który zostanie opisany później. , nie może określić nowego wirusa korony 19 i istniejących 6 typów (HCoV 229E, HCoV NL63, HCoV OC43, HCoV HKU1, SARS-CoV, MERS-CoV) oraz wszystkich koronawirusów, w tym nowych. wykrycie. Zatem negatywny wynik testu oznacza, że ​​nie jesteś zarażony koronawirusem. Wiadomo, że trwa to około 8 h. W przypadku pozytywnego wyniku testu pan-corona przeprowadza się drugie sekwencjonowanie i porównuje z sekwencjami nukleotydowymi sześciu istniejących koronawirusów. nowa korona. Geny między koronawirusami są w około 95% identyczne ze sobą.Mówi się, że zajmie to około 16 godzin.

Reakcja łańcuchowa polimerazy z odwrotną transkrypcją w czasie rzeczywistym

PCR z odwrotną transkrypcją w czasie rzeczywistym (Real-time RT-PCR) „potwierdza amplifikację DNA w reakcji PCR w czasie rzeczywistym i określa ilościowo ilość DNA oraz obecność docelowego DNA w próbce bez elektroforezy. Analiza jest możliwa.” Innymi słowy, technologia testowania amplifikacji genów w czasie rzeczywistym to metoda przyłączania „startera” lub „sondy”, która przykleja się do dwóch „sekwencji nukleotydowych, które istnieją tylko w nowym koronawirusie w technologii PCR”. Służy jako odczynnik diagnostyczny dla nowej Corony 19, a reakcja amplifikacji zachodzi tylko wtedy, gdy ten starter wiąże się z określonym genem. Dlatego po wstrzyknięciu odczynnika diagnostycznego, przy włączonym sprzęcie do amplifikacji genów, jeśli próbka (próbka) jest wystarczająco amplifikowana, aby osiągnąć określoną wartość, stwierdza się, że nowa korona jest obecna (pozytywna), a w przeciwnym przypadku , jest negatywna. Ta technologia jest publicznie dostępna Konieczne jest jedynie określenie sekwencji nukleotydów do replikacji na podstawie informacji genetycznej wirusa, a od czasu nowego kryzysu Corona 19 Chiny, Stany Zjednoczone, Niemcy, Tajlandia i Hongkong już opracował i wykorzystał tę technikę. Korea wprowadziła tę metodę badawczą 31 stycznia po udostępnieniu metody badawczej do rozwoju, masowej produkcji odczynników i oceny metody badawczej.

Kryteria diagnostyczne reakcji łańcuchowej polimerazy z odwrotną transkrypcją w czasie rzeczywistym

Zgodnie z wytycznymi diagnostyki laboratoryjnej nowego koronawirusa 2019, opracowanymi na podstawie wytycznych Centrum Analizy Chorób Zakaźnych i Światowej Organizacji Zdrowia, jako test przesiewowy zastosowano PCR genu E, a PCR regionu RdRp genu orf1b potwierdzono jako test potwierdzający ) jest używany jako Ostateczne ustalenie pozytywnych/negatywnych kryteriów dla poszczególnych testów genetycznych Możliwość potwierdzenia Jeśli badanie wykonane na próbce podejrzanego pacjenta w prywatnej placówce medycznej daje wynik pozytywny po raz pierwszy, próbkę należy dostarczyć do Koreańskiego Centrum Kontroli Chorób i Zapobieganie, aby dwukrotnie sprawdzić, czy test jest pozytywny. Powinno być. W przypadku dwukrotnego potwierdzenia pozytywnego wyniku podejrzanego pacjenta i przeliczenia go na przypadek potwierdzony, uznaje się, że placówka medyczna posiada potwierdzoną zdolność diagnostyczną, a od kolejnego podejrzanego pacjenta diagnozę można postawić tylko na podstawie wyników laboratoryjnych. (gen RdRp, gen E; gen N)

Zestaw diagnostyczny

Zestaw diagnostyczny opracowany przez Ohsang Healthcare, spółkę zależną Oh Sang-sil, to „GeneFinder COVID-19 Plus RealAmp”, który otrzymał pozwolenie na eksport zagraniczny od koreańskiego Ministerstwa Bezpieczeństwa Żywności i Leków w połowie marca 2020 r. i jest obecnie w trakcie eksportowane do ponad 30 krajów. Zestaw diagnostyczny Osang Healthcare diagnozuje zakażenie COVID-19 za pomocą amplifikacji genu w czasie rzeczywistym (RT-PCR). 16 kwietnia 2020 r. Osang Ziel uzyskał zgodę francuskiej Narodowej Agencji Leków (ANSM) na zestaw diagnostyczny COVID-19 firmy Osang Healthcare, spółki zależnej firmy Ohsangiel. Osang Healthcare uzyskał aprobatę dla tego produktu, ponieważ francuska Narodowa Agencja Leków (ANSM) dodała zestaw Osang Healthcare GeneFinder™ COVID-19 Plus RealAMP Kit do listy zatwierdzonych leków. 18 kwietnia 2020 r. zestaw diagnostyczny COVID-19 firmy Osang Healthcare otrzymał zezwolenie na zastosowanie awaryjne (EUA) od amerykańskiej Agencji ds. Żywności i Leków (FDA). Osang Healthcare jako pierwsza wśród krajowych firm wystąpiła do FDA o zgodę na zastosowanie w sytuacjach awaryjnych na początku marca.

notatka

Original article in Korean language